第9章 酶免疫技术–临床免疫学检验（中级）

一、A1 
1、下图所示的为哪一种ELISA技术的反应原理示意图（）。

A、双抗原夹心法
B、双位点一步法
C、间接法测抗体
D、竞争法
E、捕获法
2、钩状效应是指用ELISA一步法测定标本中待测抗原时，抗原浓度过（），实测值偏（）的现象，极易造成假阴性
A、低，高
B、高，高
C、高，低
D、低，低
E、高，不变
3、ELISA试验中最常用的标记酶是（）。
A、AST 
B、HRP 
C、ACP 
D、LDH 
E、ALT 
4、酶增强免疫测定技术是最早取得实际应用的（）。
A、均相酶免疫测定
B、异相酶免疫测定
C、固相酶免疫测定
D、液相酶免疫测定
E、固相-液相酶免疫测定
5、利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体的方法，通常称为（）。
A、双抗体夹心法
B、双位点一步法
C、间接法
D、竞争法
E、捕获法
6、ELISA中最常用的固相载体是（）。
A、聚氯乙烯
B、聚苯乙烯
C、三聚氧胺
D、琼脂糖
E、尼龙膜
7、均相酶免疫测定不具有的特点是（）。
A、常用于半抗原和小分子的检测
B、操作简便，易于自动化
C、不易受样品中的内源性酶的干扰
D、酶与抗原结合后仍保留酶和抗原的活性
E、灵敏度不及异相酶免测定
8、酶增强免疫测定技术（EMIT）是一种（）。
A、非均相酶免疫测定技术
B、均相酶免疫测定技术
C、酶免疫组织化学技术
D、酶免疫测定与电泳相结合的技术
E、电泳技术
9、ELISA板包被后，最常用的封闭物质是（）。
A、人白蛋白
B、人球蛋白
C、牛血清白蛋白
D、牛血清球蛋白
E、鼠白蛋白
10、可用免疫渗滤试验和免疫层析试验检测的项目没有（）。
A、抗HCV 
B、HIV 
C、HCG 
D、HBsAg 
E、HAV 
11、制备抗体酶结合物的方法通常采用（）。
A、戊二醛交联法
B、糖原染色法
C、免疫印迹法
D、酶耦联测定法
E、捕获竞争法
12、下列不属于ELISA测定方法中所必需的试剂（）。
A、固相的抗原或抗体
B、酶标记的抗原或抗体
C、酶作用的底物
D、戊二醛交联剂
E、稀释的血清
13、斑点免疫层析试验最常用的载体材料是（）。
A、乙酸纤维素膜
B、尼龙膜
C、滤纸
D、硝酸纤维素膜
E、玻璃纤维膜
14、用ELISA抗体夹心法检测抗原A时，固相载体的包被物是（）。
A、酶标记A抗体
B、未标记的抗A抗体
C、未标记抗原A 
D、酶标抗球蛋白抗体
E、酶标记的A抗原
15、ELISA检测中“钩状效应”（hookeffect）是指（）。
A、间接法检测抗体时抗体过量
B、双抗体夹心一步法检测抗原时抗原过量
C、双抗体夹心法检测抗原时RF的干扰
D、检测的假阳性反应
E、竞争法检测抗体时特异性问题
16、ELISA试验以HRP为标记酶时，常用的供氧底物为（）。
A、OPD 
B、OT 
C、YMB 
D、ABTS 
E、PNP 
17、艾滋病病毒检测的确诊试验通常采用的检测方法是（）。
A、竞争法
B、免疫印迹法
C、化学发光法
D、斑点-ELISA法
E、斑点免疫渗滤试验
二、B 
1、A.免疫印迹法
B.ELISA（双抗体夹心法）
C.自身红细胞凝集试验
D.ELISA（间接法）
E.免疫组织化学技术
<1> 、测定HIV抗体确诊HIV感染常用的方法是（）。
A、
B、
C、
D、
E、
<2> 、对相应的抗原进行定性、定位和定量测定常用的方法是（）。
A、
B、
C、
D、
E、
<3> 、检测抗原最常用的方法是（）。
A、
B、
C、
D、
E、
<4> 、可用于HIV抗体、HBsAg的检测的方法是（）。
A、
B、
C、
D、
E、
答案部分
________________________________________
一、A1 
1、
【正确答案】 B 
【答案解析】酶联免疫吸附试验（ELISA）的位点一步法是在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则可如图中所示，在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。此法不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。
2、
【正确答案】 C 
【答案解析】
3、
【正确答案】 B 
【答案解析】在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。应用AP系统，其敏感性一般高于应用HRP系统，空白值也较低。但由于AP较难得到高纯度制剂，稳定性较HRP低，价格较HRP高，制备酶结合物时得率较HRP低等原因，国内在ELISA中一般均采用HRP。
4、
【正确答案】 A 
【答案解析】均相酶免疫测定方法有酶增强免疫测定技术（EMIT）和克隆酶供体免疫分析方法。其中，酶增强免疫测定技术是最早取得实际应用的酶免疫测定方法。
5、
【正确答案】 C 
【答案解析】间接法是检测抗体最常用的方法，其原理是利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，只要更换不同的固相抗原，就可以用一种酶标抗体检测各种与抗原相应的抗体。
6、
【正确答案】 B 
【答案解析】酶免疫技术的主要试剂为固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。最常用的固相载体物质是聚苯乙烯。
7、
【正确答案】 C 
【答案解析】均相酶免疫测定是将半抗原或小分子抗原如药物、激素、毒品、兴奋剂等与酶结合制成酶标记物，酶与抗原（半抗原）结合后仍保留酶和抗原（半抗原）的活性。均相酶免疫测定操作简便、快速、适合于自动化，应用广泛，不仅可检测药物、激素、毒品、兴奋剂等半抗原或小分子抗原，也可测定大分子蛋白质、病毒及细胞性抗原成分。
最大缺点是易受样品中非特异的内源性酶、酶抑制药及交叉反应物的干扰，而且由于采用竞争性结合分析原理，灵敏度不及异相酶免测定。
8、
【正确答案】 B 
【答案解析】酶增强免疫测定技术（EMIT）是均相酶免疫测定技术。EMIT的基本原理：半抗原与酶结合成酶标半抗原，保留半抗原和酶的活性，当酶标半抗原与抗体结合后，所标的酶与抗体密切接触，使酶的活性中心受到影响而活性被抑制，反应后酶活力大小与标本中的半抗原量呈一定的比例，从酶活力的测定结果可推算出标本中半抗原的量。
9、
【正确答案】 C 
【答案解析】将抗原或抗体固相化的过程称为包被。由于载体的不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板为载体，通常将抗原或抗体溶于缓冲液（最常用的为pH9.6的碳酸缓冲液）中，加于ELISA板孔中在4℃过夜，经清洗后即可应用。如果包被液中的蛋白质浓度过低，固相载体表面有能被此蛋白质完全覆盖，其后加入的血清标本和酶结合物中的蛋白质也会部分地吸附于固相载体表面，最后产生非特异性显色而导致本底偏高。在这种情况下，如在包被后再用1%～5%牛血清白蛋白包被一次，可以消除这种干扰。这一过程称为封闭。包被好的ELISA板在低温可放置一段时间而不失去其免疫活性。
10、
【正确答案】 E 
【答案解析】免疫渗滤试验和免疫层析试验具有简便、快速、单份测定、可立等结果等优点，无需任何仪器设备，试剂稳定，因此多用于急诊检验。这类试验不能准确定量，所以主要限于检测正常体液中不存在的物质以及正常含量极低而在特殊情况下异常升高的物质。目前临床检验中已开展的项目有HCG、抗HCV和抗HIV、HBsAg等，新项目正在不断发展中。
11、
【正确答案】 A 
【答案解析】制备抗体酶结合物的方法通常有戊二醛交联法、过碘酸盐氧化法和标记抗体鉴定法。
12、
【正确答案】 D 
【答案解析】 ELISA是在固相载体上包被抗原或抗体后，通过抗原抗体反应使酶标抗体（或酶标抗原）结合到载体上，经洗涤使结合的酶标抗体和游离的酶标抗体分离，洗去游离的酶标抗体（或酶标抗原）。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体。②酶标记的抗原或抗体。③酶作用的底物。间接法和捕获法还使用稀释的血清标本做试剂。戊二醛是一种双功能团试剂，可以使酶与蛋白质或其他抗原的氨基通过它而耦联。与ELISA的方法相反。
13、
【正确答案】 D 
【答案解析】斑点免疫层析试验以硝酸纤维素为载体，利用微孔滤膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，犹如层析一般。
14、
【正确答案】 B 
【答案解析】 ELISA抗体夹心法检测抗原A时，固相载体的包被物是未标记的抗A抗体。
15、
【正确答案】 B 
【答案解析】在双位点一步法测定中，应注意钩状效应，类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。
16、
【正确答案】 A 
【答案解析】许多化合物可作为HRP的供氧体，在ELISA中常用的供氢体底物为邻苯二胺（OPD）、四甲基联苯胺（FMB）和ABTS。OPD为在ELISA中应用最多的底物，灵敏度高，比色方便。
17、
【正确答案】 B 
【答案解析】在艾滋病病毒感染中免疫印迹法作为确诊试验。
二、B 
1、
<1>、
【正确答案】 A 
【答案解析】免疫印迹法在艾滋病病毒感染中作为确诊试验。
<2>、
【正确答案】 E 
【答案解析】免疫组织化学技术是指酶标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应的抗原进行定性、定位和定量测定的一项技术。
<3>、
【正确答案】 B 
【答案解析】
<4>、
【正确答案】 C 
【答案解析】自身红细胞凝集试验可用于HIV抗体、HBsAg的检测，灵敏度与间接血凝试验相仿。