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流感鸡胚培养
发布时间：2014/08/16 微生物检验 浏览次数：532 欢迎阅读！
(1)凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数，称为该病毒的血凝滴度.
(2)血凝抑制试验（ HI ） 单纯使用血凝试验还不能作出明确的诊断，因为还有其他病原也能凝集鸡的红细胞。新城疫病毒凝集红细胞的作用，能被特异性抗体所抑制，因此，可以用已知的抗血清作血凝抑制试验，以对新分离病毒作出鉴定，操作方法如下表。凡能使 4 个凝柒单位的病毒凝集红细胞的作用完全受到抑制的血清最高稀释倍数，称为血凝抑制价（血凝抑制滴度）。
最好用 SPF 鸡胚.
一般说来，孵育至 8~14 天的鸡胚最有利于病毒的生长，因为此阶段鸡胚发育日趋完善，各种脏器均已形成，已能经受接种物的适当刺激，同时胚胎细胞幼嫩，骨胳不健全，还未长出羽毛，很利于病毒在胚胎中增殖，同时也有利于收获高滴度的病毒. 14 天以后，胚胎骨骼硬化，胚皮表面羽毛渐生，已不便感染病毒，特别是已不利于收获病毒材料。在操作鸡胚时）一定要注意到这一点。
常用的接种途径有尿囊腔、绒毛尿囊膜、羊膜腔、卵黄囊和静脉等。
（ 1 ）尿囊腔接种法
a 、选用 9~12 日龄发育良好的鸡胚，照蛋标出气室及胚胎位置，在气室底边胚胎附近无大血管处标出尿囊腔注射部位。
b 、气室向上放置鸡胚于卵架上，在气室及标记处先后用碘灯和酒精棉球消毒蛋壳表面。
c 、在所标记注射部位用剪刀尖端打孔，注意用力要稳，恰好使蛋壳打通而不伤及壳膜。为防止注射接种物时因胚胎内产生压力而使接种物溢出，可在气室顶端也打一小孔。
d 、用 1 毫升注射器抽取接种物，针头斜面（与卵壳成 30 o 角）刺入注射部位 3~5 毫米达尿囊腔内，注入接种物。一般接种量为 0.1~0.2 毫升。
e 、另一种接种方法是只开一小孔，在距气室底边 0.5 厘米处的卵壳上打一个孔，由此孔进针注射接种物。
f 、注射完毕，用熔好的石蜡或消毒胶布封闭注射孔和气室孔。气室朝上于 35~37 ℃ 温箱中孵育。弃去 24 小时内的死亡鸡胚，因多系机械损伤、细菌或霉菌污染等非特异性因素所引起，以后每天检卵 1~2 次
g 、检视出的死鸡胚、孵育 48~72 小时的活鸡胚（某些病毒并不收获活鸡胚，应弃之），取出置 4 ℃冰箱过夜或 -20 ℃冰箱中 1 小时，以免收获时流血。
h 、取出冷却的鸡胚，气室端卵壳表面用碘酊和酒精棉球消毒，用镊子无菌击破气室部卵壳并去除壳膜，撕破绒毛尿囊膜，以眼科镊子镊住绒毛尿囊膜，用毛细吸管或吸管吸取尿囊液和羊水，置无菌容器中保存备用（低温冰箱冻结保存）。一般能收获尿囊液 6 毫升左右，最多可达 10 毫升。
i 、取出鸡胚胎，于平皿内观察胚胎有无病理变化，如出血、蜷缩、侏儒胚等。根据需要，也可保存鸡胚胎或经匀浆机（器）处理后的悬浮液备用。
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