改良牛鲍（Neubauer）计数板

血细胞计数板：国内采用改良牛鲍（Neubauer）计数板。
计数板为优质厚玻璃制成。每块计数板由“H”型凹槽分为上下两个同样的两个刻度平台（即血细胞计数池）。在计数池两侧各有一条支持堤，比计数池高出0.10mm。将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。每个计数池边长均为3.00mm，平均分为9个大方格。大方格长宽均为1.00mm，面积为1mm2，覆盖盖玻片后容积为0.1mm3(即0.1?l)。盖玻片的放置方法按一般要求。每个计数池四角上的4个大方格用单线划成16个中方格，作白细胞计数用。中央大方格用双线划成25个中方格，其中位于4角的4个及中间一个共5个中方格为红细胞和血小板计数区，每个中方格又用单线划成16个小方格。

以白细胞计数为例：见八年制临床医学专业教材《实验诊断学实习指导》
操作
1.加稀释液 取小试管1支，用刻度吸管准确吸取稀释液0.38ml，置于小试管内。
2.加血
用一次性微量吸管采末梢血（或静脉抗凝血）20ml。擦去管尖外部多余的血液，将吸管插入稀释液底部，轻轻将血全部排出，然后吸取其上清液清洗吸管内残余血液2～3次。
3.溶血 混匀后室温静置5min，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全溶解破坏。
4.充池
将盖玻片置于血细胞计数板计数区上。用玻棒沾取（或用一次性吸管吸取）混匀的细胞悬液，充入计数池与盖玻片的缝隙中。静置2～3min，待白细胞下沉后显微镜下计数。
5.计数 在低倍镜下，计数四角的四个大方格中的白细胞总数（W）。
6.计算 按下列公式进行计算：
白细胞数/L= W/4×10×20×106＝W/20×109
式中：W：四个大方格的白细胞总数
W/4：换算成每个大方格（即0.1ml）内白细胞平均数。
×10：换算为1ml。
×20：为血液稀释倍数。
×106：将1ml换算为1L。

浆膜腔积液常规检查
（三）显微镜检查
【目的】掌握浆膜腔积液细胞计数和分类的方法和临床意义。
【原理】在显微镜下直接计数积液中细胞总数、白细胞数，并分类计数单个核细胞和多个核细胞。
【试剂】 冰乙酸、瑞特－吉姆萨染色液。
【器材与仪器】 光学显微镜、改良牛鲍计数板、小试管、滴管、载玻片、离心机。
【操作】
1.细胞总数计数
⑴直接用微量吸管吸取积液充入改良牛鲍计数板上下两个计数池。
⑵静置2～3min后，低倍镜下计数上下两个计数池十个大方格内的细胞总数既为每μl积液细胞总数，×106得到每升积液内细胞总数。若细胞过多，可用生理盐水稀释后计数，再将结果乘以稀释倍数。
2.有核细胞计数
⑴先将冰乙酸1～2滴放入小试管内，转动试管，使内壁附着少许冰乙酸,将多余的冰乙酸弃去，使试管底部和管壁酸化。
⑵用滴管向酸化的小试管内滴加混匀的积液2～3滴，待2～3min后红细胞完全溶解，再用滴管吸取已经酸化并混匀的积液标本充入计数池内，按细胞总数计数法计数未被溶解破坏的有核细胞数量。
3.细胞分类计数（直接分类法）
⑴白细胞计数完毕后转高倍镜观察，根据细胞核的形态特点（参考图7－1），分别计数单个核细胞（多为淋巴与单核细胞）与多核细胞（多为中性粒细胞）数量。
⑵一般应计数100个白细胞，以百分率表示。如果全盘白细胞总数不足100个时，以实际计数到的单个核细胞和多个核细胞数量报告。
4.细胞分类计数（涂片染色分类法）
⑴浆膜腔穿刺液抽取后立即离心沉淀，将沉淀物滴在载玻片上，制成涂片，用瑞特－吉姆萨染液染色。
⑵根据细胞的形态特点，在显微镜油镜下进行分类。计数200个细胞，将见到的淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、间皮细胞等以百分率报告。若发现疑似肿瘤细胞须同时报告。
【注意事项】
1. 常规细胞计数分类可采用直接计数法，但分类误差较大。如见较多间皮细胞，较大细胞及形态变异或不能识别的细胞，建议应用染色分类 法。
2.有核细胞数量计数应包括间皮细胞。
3.若瑞特－吉姆萨染色仍然不能进行分类的不明细胞，建议采用HE或巴氏染色进行肿瘤细胞查找。
【临床意义】
1.细胞计数 漏出液中细胞较少，一般低于100×106/L ，渗出液中细胞数多，常在500×106/L以上。
⑴红细胞 由于穿刺损伤，两种积液都有少量红细胞，如大量出现可见于肿瘤、结核等。
⑵白细胞分类 漏出液中主要为间皮细胞及淋巴细胞，渗出液中因病因不同而可分为中性粒细胞为主，淋巴细胞为主和嗜酸性粒细胞为主。①
中性粒细胞为主；多见于急性化脓性感染或结核感染早期。②淋巴细胞为主；多见于慢性感染如结核，梅毒等。③嗜酸性粒细胞增多见于 过敏性疾病或寄生虫病。
⑶细胞学检查 浆膜腔积液中检出肿瘤细胞，是诊断原发性或转移性肿瘤的重要依据。
⑷细菌学检查 渗出液进行细菌培养常可找到病原菌。

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以上内容摘自吴健民，鄢盛恺主编《实验诊断学实习指导》（八年制临床医学专业教材），人民卫生出版社，2005年。