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生物大分子的分离纯化
发布时间：2014/06/28 生物化学 浏览次数：727 欢迎阅读！
核酸分离纯化的原则：
——–1、保持核酸一级结构的完整性；
——–2、尽可能提高核酸制品的纯度
从真核细胞中提取基因组DNA【实际为多种基因组DNA片段的混合物】的主要方法：
——–1、酚抽提法
——–2、甲酰胺解聚法
——–3、玻璃棒缠绕法
基因组DNA纯化的原则：
——–1、保证DNA片段的回收率
——–2、保证纯度
常用的DNA纯化的方法：
——–1、DEAE-纤维素膜插片法
——–2、电泳洗脱法
——–3、低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法
——–4、PAGE DNA片段回收法
核酸浓度和纯度的测定方法：
——–1、紫外分光光度法
——–2、荧光光度法
核酸完整性的鉴定方法主要是琼脂糖凝胶电泳法。
提取质粒的常用方法：
——–1、碱裂解法
——–2、煮沸裂解法
——–3、SDS裂解法
质粒纯化的手段：
——–1、CsCL-EB 法
——–2、PEG沉淀法
——–3、柱层析法
最常用的RNA提取方法：酸性异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法
制备mRNA的主要方法：
——–1、oligo(dT)-纤维素柱层析法
——–2、oligo(dT)-纤维素液相结合离心法
——–3、oligo(dT)-纤维素柱离心法
——–4、磁珠分离法
蛋白质分离纯化的准则：
——–1、保证蛋白结构的完整性，防止降解和活性蛋白的变性；
——–2、保证靶蛋白的纯度
蛋白质粗分离方法：
——–1、盐析法
——–2、有机溶剂沉淀法
——–3、等电点沉淀法
——–4、离心法
蛋白质细分离方法：
——–1、凝胶过滤层析法
——–2、亲和层析
——–3、离子交换层析
——–4、制备HPLC【是十分有效的分离纯化方法】
——–5、电泳法
——–电泳法有：
——–1）、PAGE
——–2）、SDS-PAGE
——–3）、IPG-IFE
——–4）、2-DE【是目前分辨率最高的分离纯化方法】
——–5）、CE
检测靶抗原、从多克隆抗体中鉴定单抗的有力手段：Western blot
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