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【微生物检验笔记】第19章 肠杆菌科及检验(上)
发布时间：2013/08/04 微生物检验 标签：ARGCITGASH2SINDKIALYSMOTMRONPGORNPADUREV-Pvpβ-半乳糖苷酶产气产碱产酸克氏双糖铁克雷伯菌属分泌液动力变形菌属吲哚哈夫尼亚菌属埃希菌埃希菌属尿液微生物检验笔记志贺菌属摩根菌属普罗维登斯菌属枸橼酸杆菌菌属枸橼酸盐沙门菌属沙雷菌属浓汁爱德华菌属痰硫化氢；甲基红精氨酸双水解酶耶尔森菌属肠杆菌属胆汁脑脊液脲酶苯丙氨酸脱氨酶血液赖氨酸脱羧酶迁徙现象鸟氨酸脱羧酶浏览次数：490 欢迎阅读！
在概述中一定要记清概念和共同特点，只有掌握而来才才事半功倍
重点掌握：埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、变形杆菌属、普罗威登斯菌属、摩根菌属、耶尔森菌属
【肠杆菌科细菌的概述和通性】
–【概念】：革兰阴性杆菌，大多属于正常菌群作为条件致病菌致病，肠杆菌科细菌包括常引起腹泻和肠道感染的细菌（埃希、志贺、沙门、耶尔森）和常导致院内感染的细菌（枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙门菌属、变形杆菌属、普罗威登斯菌属、摩根菌属）和其他的一些条件偶尔引起感染的细菌。
–【分类】：《伯杰系统细菌学手册》（1984年）将肠杆菌科细菌分为20个属，包括埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗维登斯菌属、变形菌属、摩根菌属、耶尔森菌属等。
–【生物学特性】
<形态与染色>：革兰阴性，1-6μm×0.6-1.0μm，无芽孢，少数有荚膜，多数有周鞭毛【有四类细菌无鞭毛：志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌属、EIEC】，
<培养>：需要或兼性厌氧，营养要求不高，在普通琼脂和麦康凯培养基上均能生长，形成中等大小S型菌落，在液体培养基中呈浑浊生长。
【特别注意：作为肠道杆菌，在外面进行标本采集时多采集到的是粪便标本，而大便里存在着大量的正常菌群，故我们在培养时多采用选择性培养基进行培养，其中强选择性培养基有SS平板（主要分离志贺菌、沙门菌），弱选择性培养基有麦康凯、中国蓝、伊红美蓝培养基，在这些培养基上有利于肠道杆菌分离生长】
<生化反应>：— [肠道杆菌定科试验（四点）：革兰阴性杆菌、触酶阳性、氧化酶阴性、硝酸盐还原试验阳性]
发酵葡萄糖：产酸产气，
发酵乳糖： 肠道非致病菌(大多数肠道杆菌发酵乳糖，属非致病菌)（+）、肠道致病菌（-）；【例外：变性杆菌虽然是非肠道致病菌，但是它不发酵乳糖】
<抗原构造>（3种）：
1）菌体抗原—-O;
2）鞭毛抗原—-H；
3）表面抗原—Vi、K；
<变异>：
1）菌落S-R变异；
2）鞭毛H-O变异；
3）耐药性或生化反应性质的改变
<抵抗力>：能耐胆盐，对低温有耐受力，抵抗力不强，60oC 30min就可以杀死，不耐干燥、对化学消毒剂敏感。
<致病性>
1）致病性肠道杆菌：肠内感染（共显症状为腹泻，有急慢性肠道感染、食物中毒、旅游者腹泻、肠热症）
2）条件致病菌：医院感染主要病原菌（移位感染）
【微生物学检验】
<分离培养>：粪便和肛拭子立即接种肠道选择性培养基上或先增菌后再分离，血、尿或浓汁原则上不适用选择性培养基。分离纯菌后，根据菌落特点、结合革兰染色镜检结果及氧化酶反应结果进一步鉴定。
<鉴定>
（1）初步鉴定的原则
1）确定肠道菌科的细菌：采用葡萄糖氧化-发酵实验及氧化酶实验与弧菌科（氧化酶+）和非发酵菌（氧化酶+）加以鉴别；
2）肠杆菌科细菌的分群：采用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，将肠杆菌科细菌分为苯丙氨酸脱氨酶阳性、葡萄糖酸盐利用试验阳性和两者均为阴性的三个类群；
3）选择生化反应进行种属鉴别：将选择培养基或鉴别培养基上的可疑菌落分别接种克氏双糖铁（KIA）和尿素-靛基质-动力（MIU）复合培养基管中，并根据其六项反应结果将细菌初步定属。
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【备注】 KIA:克氏双糖铁；GAS:产气；H2S:硫化氢； MR:甲基红(产物酸性显红色pH4.0以下)[细菌分解GS为丙酮酸，然后丙酮酸进一步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，此时甲基红指示剂呈红色反应]； V-P（细菌分解GS为丙酮酸后使丙酮酸脱羧形成中性的乙酰甲基甲醇（此时培养基环境仍是碱性环境），在此碱性环境中空气中氧气将其氧化为二乙酰<与蛋白胨中精氨酸所含的胍基反应生成红色反应物，在此培养基中加入少许很胍基的化合物可加速此反应>）； IND:吲哚；CIT:枸橼酸盐；PAD:苯丙氨酸脱氨酶；URE:脲酶；MOT：动力；LYS：赖氨酸脱羧酶；ARG：精氨酸双水解酶；ORN：鸟氨酸脱羧酶；ONPG:β-半乳糖苷酶； A:产酸；K:产碱；++：强阳性；+：90%以上菌株阳性；-：90%以上菌株阴性；+/-:50%-90%菌株阳性；-/+：50%-90%菌株阴性 a：迁徙现象+；b：22-25oC阳性，35oC阴性 |
【埃希菌属】
【概念】包括5个种：大肠埃希菌（俗称的大肠杆菌）、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌、伤口埃希菌
大多数为正常菌群
【生物学特性】
（1）形态特性：革兰阴性短杆菌，有周鞭毛，能运动，有菌毛，荚膜及微荚膜，1-3um*0.4-0.7um.
（2）培养特性
普通营养琼脂：灰白色光滑型菌落，
血琼脂：少数产溶血环；
伊红美蓝：发酵乳糖，菌落呈蓝紫色并有金属光泽；
麦康凯、SS琼脂：胆盐对其有抑制作用，耐受菌株能生长并形成粉红色菌落（分解乳糖是培养基内指示剂显色）。
（3）生化：
1）IMViC（吲哚、甲基红、VP、枸橼酸盐）:++- -,[肠杆菌属多为：- -++（产气肠杆菌）]
2）KIA:斜面和底层产酸产气（A/A），H2S阴性
3）MIU(动力、吲哚、尿素):++-
（4）抗原结构：3种：菌体抗原（O）、表面抗原（K）、鞭毛抗原（H），现已知有171中O抗原、100种K抗原、56种H，以O:K:H方式来表示其血清型
【致病性】
致病因素：侵袭力、内毒素、肠毒素
所致疾病：胆囊炎、泌尿系感染、肺炎、新生儿脑膜炎、伤口感染、败血症、腹泻、内毒素症状（发热、休克、DIC）
（1）肠道外感染：有条件致病菌所致
（2）肠道感染：分别由肠道埃希菌的5个病原群引起
1）肠产毒型大肠埃希菌（ETEC）：引起霍乱样肠毒素腹泻（水样便）
2）肠致病型大肠埃希菌（EPEC）：主要引起婴儿腹泻
3）肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC）：可侵入结肠粘膜上皮，引起志贺样腹泻（能产生粘液脓血便）
4）肠出血型大肠埃希菌（EHEC）：即产志贺样毒素（VT）大肠埃希菌（SLTEC或UTEC）,,其中O157：H7可引起出血性大肠炎和溶血性尿素综合征（HUS）【临床表现：严重腹痛、痉挛，反复出血性腹泻，伴发热呕吐，严重者可发展为急性肾衰竭】。
5）肠粘附（聚集）型大肠埃希菌（EAggEC）：近年来报道引起腹泻的大肠埃希菌
（3）CDC将大肠埃希菌列为常规检测项目，其在北美地区占肠道分离病原菌的第二或第三位，是从血便中分离到的主要病原菌，分离菌占血便的40%，每年6、7、8三个月高发，是4岁以下儿童急性肾衰竭的主要病原菌
【微生物学检验】
<标本采集>
1）肠道感染：粪便
2）肠道外感染：中段尿液、血液、浓汁、胆汁、脑脊液、痰、分泌液
<检验方法及鉴定>
（1）涂片镜检：胆汁或增菌液发现单一革兰阴性杆菌，可初报染色、形态、性状供临床用药参考
（2）分离培养
1）粪便标本：用弱选择鉴别培养基
2）浓汁等其他的标本：用血平板
取可疑菌落进行形态观察和生化反应
（3）鉴定—【肠道内感染需要做血清学分型，毒素测定和毒力试验】
首先需要满足肠杆菌科细菌的定科试验：[肠道杆菌定科试验（四点）：革兰阴性杆菌、触酶阳性、氧化酶阴性、硝酸盐还原试验阳性]
1）初步鉴定：根据菌落特征，染色形态和染色反应，取纯培养物做生化反应，凡符合：IMViC:++–，氧化酶阴性，MIU:(+或-)+-，KIA:A(K)/A,H2S阴性，可鉴定为大肠埃希菌。
2）致病性大肠埃希菌鉴定：
1))EPEC：
2))EIEC：（主要与志贺菌鉴别）
| 大肠埃希菌 | 志贺氏菌 | |
| 醋酸钠试验 | + | – |
| 葡萄糖铵利用试验 | + | – |
| 粘质酸盐产酸试验 | + | – |
3))ETEC：采用乳鼠胃内灌注法检测ST
4))EHEC：血清学鉴定
5))EAEC：检测细菌对HEP-2细胞或Hela细胞的粘附性
（食物、饮料、水等卫生细菌学检查，主要进行大肠菌群指数检查）
大肠埃希菌是超光谱β-内酰胺酶（ESBLs）是主要产酶株，该酶有质粒介导。
对于ESBLs产酶株感染所致的疾病，需要采用碳青霉烯类或内酰胺类抗生素/酶抑制剂或头孢菌素类进行治疗。
