【微生物检验笔记】第18章 病原性球菌及检验（下）

链球菌属

触酶阴性，革兰阳性、圆形或椭圆形球菌、链状排列、兼性厌氧、在液体培养基中呈沉淀生长（肺炎链球菌呈浑浊生长），在血琼脂平板上能形成不同的溶血现象。

在浓汁中短链，成双或单个存在，无鞭毛、无芽孢，某些在血清肉汤中可形成荚膜。

培养特性：用营养培养基，多用血琼脂，在5%CO₂ 环境下生长更好。在血琼脂平板上35 ^oC 18-24h培养后可形成灰白色、圆形突起、直径为0.1-0.75mm小菌落，不同链球菌的菌落周围形成不同的溶血环。

生化反应：触酶阴性（以此和葡萄球菌属鉴别）

分类：

（1)按链球菌在血平板上溶血环的特性来分：

1）甲型（α）溶血链球菌：又称草绿色链球菌————-条件致病菌

2）乙型（β）溶血链球菌：透明溶血环，通称溶血性链球菌—————致病性最强，常引起人或动物多种疾病。

3）丙型（γ）链球菌—–无溶血环，一般不致病。

（2）根据链球菌细胞壁抗原（即C抗原）分类（即常用的Lancefield血清分型法）：

分为A到T共18个血清型（其中I和J缺），对人类致病的90%属于A群,B、C、D、G较少见

抵抗力：对理化因素抵抗力不强。

【致病性】

A群链球菌：

草绿色溶血性链球菌：属于条件致病菌，常与亚急性心内膜炎有关。

B群链球菌：是新生儿肺炎、脑膜炎和败血症的病原体

D群链球菌：引起呼吸道和泌尿道感染

【治疗原则】

A群链球菌：青霉素G为首选，

B群链球菌：常采用青霉素G和一种糖苷类合用。

【微生物学检验方法】

（1）标本采集：不同疾病不同标本，如：

急性化脓：浓汁脓液

风湿：采集血液查抗体

（2）检验方法、鉴定

1）直接镜检：如符合链球菌形态特征可初报

2）直接检测抗原

3）分离培养:

血液标本：无菌分别取两份血液各8-10ml,分别注入肉汤培养基，分别置需氧和厌氧环境增菌，有细菌生长，然后分别接种两个血平板，置需氧和厌氧环境中培养

浓汁和咽拭子标本：接种血平板病涂片染色镜检，如革兰阳性，形似链球菌，可初报，

—-上述培养物经35 ^oC 18-24h培养后，观察菌落特征和溶血情况【链球菌：菌落较小，透明或半透明，似针尖大小，凸起，菌落周围可出现不同溶血现象】，取可疑菌落涂片染色镜检证实，

——甲链和肺炎链球菌均可产生α溶血，且它们的菌落形态非常相似，须鉴别【用Optochin耐药试验、胆汁溶菌试验、菊糖溶解试验来鉴别，肺链此三种反应均为阳性】

——猪链球菌：在羊血平板上为α溶血，在兔血平板上为β溶血

鉴定：见生化反应。

《肺炎链球菌》—链球菌科，链球菌属

革兰阳性，球菌，矛头状成双排列，有荚膜、无鞭毛、无芽孢。

【培养特性】：需氧或兼性厌氧，最适温度35 ^oC-37 ^oC，最适pH7.6-8.0，营养要求高，在血琼脂平板上形成脐状菌落，周围草绿色溶血环。

在液体培养基上培养时间过长，可因自溶而培养液变澄清，管底沉淀。

【生化反应】：菊糖、胆汁溶解试验阳性，Optochin敏感试验阳性（即对Optochin敏感）—-以此同其他草绿色的链球菌相鉴别

【致病性】

致病物质：荚膜

所致疾病：大叶性肺炎、支气管炎

【微生物学检验方法和原理】

（1）标本采集：痰液、咽拭子

（2）试验方法及鉴定

1）直接涂片镜检：革兰染色见革兰阳性矛尖状双球菌

2）分离培养：

血液、脑脊液：须增菌培养，经葡萄糖硫酸镁增菌后，肺炎链球菌科呈均匀浑浊而且有绿色荧光，

浓汁或脑脊液沉渣：无需增菌，直接接种血琼脂，置5%-10%CO₂ 环境中，经35 ^oC 18-24h培养后观察菌落，并取可疑菌落做进一步鉴定。

（3）鉴定

阳性试验：胆汁溶解、聚糖发酵、Optochin敏感试验、荚膜肿胀试验、动物试验（对小白鼠极为敏感）、快速乳胶凝集试验。

《肠球菌属》—-是肠道的正常寄居菌

生物学性状：触酶阴性，革兰阳性、卵圆形球菌、成双或短链排列、无荚膜、无芽孢、部分细菌有稀疏鞭毛（细菌的运动器官—有动力），营养要求高，需氧及兼性厌氧，在血琼脂上表现为γ溶血或α溶血，多数肠球菌能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR），在胆汁七叶苷和含6.5%NaCL的高盐培养基中可以生长（利用这点可与链球菌鉴别）

本菌与链球菌的显著区别【三高】：在高盐（6.5%NaCL），高碱（pH9.6），40%胆汁培养基上和10 ^oC—40 ^oC环境下生长，病对多种抗菌药物表现为固有耐药。

—–临床意义：肠球菌是仅次于葡萄球菌属的重要医院感染病原菌，最常见为尿路感染，其次为腹部、盆腔及外科手术感染

分离率：最高是的粪肠球菌、其次是屎肠球菌。粪肠球菌的某些菌株在马血、兔血琼脂平板上表现为β溶血。

【微生物检验方法及原理】

合理采取标本（尿液、浓汁、胆汁、分泌物或血液等）涂片（初步检查）—->分离培养后（挑取可疑菌落进行涂片、染色、镜检、触酶试验、胆汁七叶苷试验、高盐6.5%NaCL耐受试验，如此可鉴定到属）,如需鉴定到种还需要进行生化试验。

对有临床意义的肠球菌应进行体外药敏试验：

———–β-内酰胺类【亲霉素类、头孢菌素类】尤其是亲霉素类（亲霉素、氨苄西林）

———–多肽类抗生素尤其是万古霉素类，耐万古霉素肠球菌（VRE）国外检出率较高

———–氨基糖苷类尤其是庆大霉素

【治疗原则】：β-内酰胺类和氨基糖苷类抗生素联合治疗。

革兰阴性球菌：主要是奈瑟菌属和卡他布兰汉菌属

《奈瑟菌属》–革兰阴性双球菌、氧化酶阳性、有菌毛、无鞭毛、无芽孢，其中对人致病的主要是淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌

★脑膜炎奈瑟菌★–即平时所说的脑膜炎球菌，引起流行性脑脊髓膜炎（即流脑）

【生物学特性】：

革兰阴性双球菌，肾形坦面相对成对排列，0.6-1.5μm，多位于中性粒细胞内。

属苛养菌，需氧，营养要求高，需在含血清或含多种氨基酸、无机盐等物质的培养基上才生长良好

分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气（淋病奈瑟菌不分解麦芽糖，可就此与鉴别）,,触酶阳性、氧化酶阳性。

[抗原及分型]—-四种抗原，分型为十个群

群特异性荚膜多糖抗原：据此抗原不同，采用凝集反应和琼脂扩散试验将本菌属分为A、B、C、D、X、Y、Z、1916、29E、W135十个群，对人致病的主要是A群，偶见B、C、1916群

外膜蛋白特异性抗原

脂多糖抗原

核蛋白抗原

【临床意义】

致病物质：菌毛、荚膜、内毒素

所致疾病：流脑（表现：发热、皮肤瘀斑、脑膜刺激征）

[脑膜刺激征:脑膜受激惹的体征，是脑膜病变时脊髓膜受到刺激并影响到脊神经根，当牵拉刺激时引起相应肌群反射性痉挛的一种病理反射。见于脑膜炎，蛛网膜下腔出血和颅内压增高等。
表现为：
1.头痛常剧烈，是最常见的症状，病程早期即可出现。一般为弥漫性，有时有枕部和额部特别显着。呕吐则多为喷射性。
2.颈肌强直：颈部肌肉强硬对被动运动有抵抗，如被动屈颈则有肌痉挛及疼痛。
3.克氏征：下肢髋、膝关节屈曲成直角，然后使小腿伸直，正常可伸直达135°以上，如遇抵抗，小于135°并觉疼时为阳性。
4.布氏征：患者仰卧，被动向前屈颈时，两下肢自动屈曲为阳性，为小脑脑膜刺激征。
另外还有皮肤感觉过敏，对听觉和视觉刺激过敏等。
]

病原体存在于携带者或病人的鼻咽部，借飞沫经空气传播，冬末春初高发流行。

【微生物检验和鉴定】

 标本采集：血液、瘀斑渗出液、脑脊液、鼻咽分泌物。采集的标本不宜放冰箱，应立即送检，因本菌可产生自溶酶而自溶。

 检验方法和鉴定：

1）直接涂片检验：CSF沉淀涂片或瘀斑血印片，干燥固定后革兰染色见到肾形成对排列的革兰阴性双球菌，在中性粒细胞内或外均可初报。

2）分离培养：将标本的葡萄糖肉汤增菌液直接接种血琼脂平板、巧克力琼脂或EPV琼脂（4.卵黄双抗琼脂），置5%-10%CO₂ 环境中，经35 ^oC 18-24h培养后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径1-2mm的小菌落，经涂片证实为革兰阴性双球菌，并进一步进行相应生化试验鉴定。

3）鉴定：

1））细菌染色形态特征

2））氧化酶试验阳性

3））触酶试验阳性

4））分解葡萄胎、麦芽糖，产酸不产气

5））荚膜多糖抗原直接凝集

【治疗原则】亲霉素G首选，其次考虑三代头孢或氯霉素

★淋病奈瑟菌★—-即淋球菌，人是其唯一天然宿主和传染源

 【生物学特性】

形态似脑膜炎奈瑟菌（肾形坦面性对成对排列革兰阴性双球菌）无芽孢、无鞭毛，浓汁标本中此菌多位于中性粒细胞内，慢性淋病时常位于胞外，从患者体内新分离的菌株有荚膜和菌毛，而经人工培养后呈卵圆形或球形，排列不规则。

 培养：需氧，营养要求较高，需在含有血液、血清或多种氨基酸和无机盐类物质的培养基上才生长良好，国内常用血液琼脂、巧克力琼脂、EPV琼脂，初次分离需置5%-10%CO₂  条件下才能生长。

生化反应：发酵葡萄糖，产酸，不分解麦芽糖（可就此与脑膜炎奈瑟菌鉴别），氧化酶和触酶试验阳性，

抗原：菌毛蛋白抗原、脂多糖抗原、外膜蛋白抗原

抵抗力：极低

【微生物学检验】

标本采集：脓性分泌物、尿道拭子、宫颈分泌物拭子、结膜分泌物、血液

检验方法和鉴定：

1）直接涂片检查：涂片后革兰染色镜检，见中性粒细胞内数对格兰阴性双球菌，可初报。

2）分离培养：是WHO推荐的淋病患者筛选的唯一方法。

 所采集的标本应及时接种含两种以上抗生素（万古霉素和多粘菌素等）的营养培养基(EPV)上。

营养要求高，对冷、热、干燥、消毒剂抵抗力低，采样后必须立即接种预温的选择性培养基和非选择性培养基（如巧克力平板）中，置5%-10%CO₂ 环境中，经35 ^oC 48h培养后 ,取小而透明似水滴状、无色素易乳化菌进一步鉴定。

3）鉴定：取可疑菌落涂片革兰染色镜检，若见格兰阴性双球菌，则：

生化反应：氧化酶阳性、仅分解葡萄胎产酸，

免疫学方法：荧光抗体染色法、协同凝集试验

核酸探针杂交法：

 【氧化酶试验阳性可初判，并进行相关生化试验，如仅发酵葡萄糖而不发酵麦芽糖与蔗糖，以及30%H₂O₂  试验阳性可与脑膜炎奈瑟菌相鉴别 】

 【临床意义】：是淋病的病原菌，通过性接触直接感染泌尿生殖道，口咽部及肛门直肠的粘膜，

 所致疾病：单纯性淋病、盆腔炎、淋菌型结膜炎

 【治疗原则】首选三代头孢菌素，氟喹诺酮类、壮观霉素可作为替代药物。