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【微生物检验笔记】第12章 细菌的分离和培养技术
发布时间：2013/07/01 微生物检验 标签：L型菌落L细菌α溶血β溶血γ溶血不溶血产气荚膜梭菌分离动力双环培养完全溶血平板微生物检验笔记接种气味细菌色素草绿色溶血菌落浏览次数：575 欢迎阅读！
细菌实验室条件：密闭的门窗、禁用风扇、有对空气进行消毒灭菌的紫外灯（每天工作之前消毒20-30分钟，并定期监测紫外线消毒效果）、备用有常用消毒剂、洗手水池、操作台每天要用消毒剂用消毒剂擦拭、对有菌和无菌物品要分开存放、注意室内温度控制、有消防设备。
无菌实验室条件：除紫外线消毒外还要定期甲醛熏蒸
常用设备：接种环、显微镜、培养箱、厌氧培养箱、二氧化碳培养箱、高压蒸汽灭菌器、干烤箱、冰箱或冷藏柜、pH计、试管
细菌的接种和分离技术
| 接种分离法 | 用途 |
| 平板划线分离法：连续划线 | 用于杂菌不多时 |
| 平板划线分离法：分区划线 | 用于杂菌较多时 |
| 斜面接种 | 单个菌落纯培养、保存菌种、观察细菌特性 |
| 液体接种法[避免气溶胶] | 接种液体生化试管 |
| 穿刺接种法 | 用于半固体培养基、明胶、双糖管 |
| 倾注平板法 | 测牛乳、饮用水、尿液细菌数 |
| 涂布接种法 | 用于纸片发药敏实验和被检标本中的细菌计数 |
细菌培养的方法：
1、需氧培养法（适用于需氧菌和兼性厌氧菌培养）：一般35oC 18-24h，【特殊：鼠疫耶尔森菌最适生长温度在28-30oC；李斯特菌4oC也能生长】
2、二氧化碳培养法：5-10%CO2 脑膜炎奈瑟杀菌、淋病奈瑟杀菌、牛布鲁氏菌。
二氧化碳培养法可用：二氧化碳培养箱法、烛缸法、化学法
3、厌氧培养法：适用于专性厌氧菌和兼性厌氧菌
厌氧培养法可用：庖肉培养基法、焦性没食子酸法、厌氧罐法、气袋法、厌氧手套箱法
细菌的生长现象：
（一）、细菌在分离培养基上的菌落现象：
1、观察菌落：表面特征【光滑型（S型）、粗造型（R型）、粘液型（M型）】、大小、性状、突起、边缘、颜色、表面、透明度、粘度
2、血琼脂平板上溶血现象：
α溶血：又称草绿色溶血，菌落周围血培养基变为绿色环状；红细胞外形完整无缺。
β溶血：又称完全溶血，因红细胞的溶解在菌落周围形成一个完全清晰透明的环。
γ溶血：即不溶血，菌落周围培养基无变化，红细胞无缺损也无溶解。
双环：在菌落周围完全溶解的晕圈外有一个部分溶血的第二圆圈，如产气荚膜梭菌会这样
3、气味
生姜气味：铜绿假单胞菌
巧克力烧焦气味：变形杆菌
腐败的恶臭味：厌氧梭菌
泥土味：放线菌
4、色素
脂溶性色素：使菌落本身出现颜色改变，如金葡的金黄色色素。
水溶性色素：使菌落周围的培养基出现颜色变化，如铜绿假单胞菌的铜绿色色素
（二）、细菌在液体培养基中的生长现象
浑浊生长：大多数菌
沉淀生长：少数链状排列的细菌，如链球菌、炭疽芽孢杆菌
菌膜生长（表面生长）：专性需氧菌如枯草芽孢杆菌、结核分枝杆菌、铜绿假单胞菌
（三）、细菌在半固体培养基中生长现象：主要是观察有没有动力
细菌L型菌落的检查：无菌采集标本，胸水、腹水和尿液标本应加20%蔗糖无菌溶液以保持高渗，血液标本应接种至高渗肉汤增菌培养，培养1-7天，如增菌液出现轻度浑浊或有沉淀产生，在分离接种于L型选择平板和血平板。
典型L型细菌菌落为“荷包蛋”样，但是新分离的L型菌落常不典型，多呈颗粒型菌落，涂片染色多形性，必要时经传代返祖进一步坚定菌种。
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