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尿素酶(Urease)试验:有些细菌能产生尿素酶,将尿素分解、产生2个分子的氨,使培养基变为碱性,酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶,因为不论底物尿素是否存在,细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。
试验方法:挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中,摇均,于36±1℃培养10,60和120min,分别观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面,不要到达底部,留底部作变色对照。培养2,4和24h分别观察结果,如阴性应继续培养至4天,作最终判定,变为粉红色为阳性。
临床上用以测定胃部(通常为胃窦、胃体)活检组织中的尿素酶的定性试验。是诊断消化道幽门螺杆菌感染的重要诊断指标。需要在胃镜下取胃粘膜组织后进行,是侵入性检测幽门螺杆菌的首选方法,具有操作简便、费用低的优点。
1984年科学家发现幽门螺杆菌一个重要特征是能够产生释放大量的尿素酶,其尿素酶的酶活性是目前已知细菌所产尿素酶活性中最高的。尿素酶对幽门螺杆菌自身具有保护作用,它能水解尿素,生成氨气和二氧化碳,氨气能在幽门螺杆菌体周围形成保护性“氨云”,中和胃酸,是局部的pH升高,便于细菌定植致病。根据这一原理,Marshall等人设计了快速尿素酶试验用于诊断幽门螺杆菌感染。 检验试剂中含尿素、pH指示剂、防腐剂和缓冲剂,可制成试液、琼脂和纸片等。活检取样通常在胃窦,为提高敏感性亦可在胃体夹取一块组织,标本放置于试剂后观察颜色变化,判断结果,时间在30分钟至24小时之间,视试剂性能而定。pH指示剂在酸性条件下,酚红呈黄褐色,若试剂颜色由黄褐色变成红色或紫红色,判为阳性,若不变则判为阴性。此法特别适合在基层单位开展,准确定达90%以上,是目前临床上最常用的诊断方法。
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