常见细菌生化反应操作与结果判断

一．糖发酵试验
1.原理 由于各种细菌所含酶类的不同，故对糖（醇）的分解能力不同，其代谢产物也不一样。有的细菌能分解某些糖而产酸和产气，有些细菌能分解某些糖只能产酸，还有一些细菌因缺乏某些糖分分解酶则不能分解某些糖类。细菌对糖的不同分解能力可用来鉴别细菌。
2.方法 将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种葡萄糖、乳糖发酵管，35℃培养18～24小时观察结果。
3.结果 观察结果时，首先确定细菌是否生长，细菌生长则培养基呈混浊状态，再确定细菌对糖的分解情况。
(1)不分解糖：培养基颜色与接种前相比无变化，记录时以“-”表示。
(2)分解糖只产酸不产气：培养基中所含的指示剂（溴甲酚紫）由紫色变为黄色，液体培养基的倒置管中未发现气泡。若为半固体培养基，则培养基内未见气泡或琼脂断裂，记录是以“+”表示。
(3)分解糖既产酸又产气：除培养基中的指示剂颜色改变外，在液体培养基的倒置小管中出现气泡，若为半固体培养基，则培养基内可见气泡或琼脂断裂，记录时以“ ”表示。
本试验大肠埃希菌分解葡萄糖和乳糖产酸又产气 “ ”，伤寒沙门菌分解葡萄糖只产酸不产气“+”，不分解乳糖“-”。

二．甲基红试验（MR试验）
1.原理 某些细菌发酵葡萄糖形成丙酮酸，丙酮酸可进一步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，使培养基的PH下降至4.4以下，此时加入甲基红指示剂后培养基呈现红色反应（阳性）。有些细菌分解葡萄糖产生酸进一步转化为醇、醛、酮等非酸物质，使培养基的PH在5.4以上，加入甲基红指示剂呈黄色（阴性）。
2.方法 将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水中，经35℃培养24小时，观察结果。
3.结果 在培养物中加入甲基红指示剂2～3滴，立即观察，呈现红色为阳性，黄色为阴性。本实验大肠埃希菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
三.V-P试验
1.原理 有些细菌在发酵葡萄糖产生丙酮酸后，使丙酮酸脱羧，形成中性的乙酰甲基甲醇，后者在碱性环境中被空气中的氧气氧化为二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸所含的胍基反应，生成红色反应物。若在培养基中加入少量含胍基的化合物，如肌酸或肌酐，可加速反应。
2.方法 将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水中，经35℃培养24～48小时，与培养基中加入v-p试剂，混匀后观察结果。
3.结果 如立即或数分钟内出现红色为阳性，若为阴性应将试管置35℃4小时后再进行观察，仍无红色者为阴性。本试验大肠埃希菌为阴性，产气肠杆菌为阳性。
四.靛基质试验（吲哚试验）
1.原理 某些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸而生成靛基质（吲哚），后者与二甲基氨基苯酚作用，形成红色的玫瑰靛基质（玫瑰吲哚）。
2.方法 将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于蛋白胨水中，经35℃培养18～24小时，观察结果。
3.结果 在培养物中沿管壁加入靛基质试剂数滴，静置半分钟，使成两成，两液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。本试验大肠埃希菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
五．硫化氢生成试验
1.原理 有些细菌能分解蛋白质中的含硫氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸等），产生硫化氢（H S）。当培养基含有铅盐或铁盐时，硫化氢可与其反应生成黑色发热硫化铅或硫化亚铁沉淀。
2.方法 将大肠埃细菌与普通变形杆菌分别穿刺接种到醋酸铅培养基中，35℃培养24～48小时，观察结果。
3.结果 培养基变黑为阳性，不变色为阴性。本试验大肠埃希菌为阴性，普通变形杆菌为阳性。
六．尿素分解实验
1.原理 能产生尿素酶的细菌，能分解尿素生成氨和CO2，氨在溶液中形成碳酸铵，使培养基变碱性，酚红指示剂呈红色。
2.方法 将大肠埃希菌和普通变形杆菌分别接种于尿素培养基中，35℃培养18～24小时，取出观察。
3.结果 培养基呈红色反应为阳性；不变色为阴性。本试验大肠埃希菌为阴性，普通变形杆菌为阳性。
七．枸橼酸盐利用试验
1.原理 某些细菌能利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐（如磷酸二氢铵）作为唯一氮源。细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生的碳酸钠和分解氨盐生成的氨（NH3），均能使培养基变碱，使溴麝香草酚蓝PH指示剂由淡黄色变为深蓝色。
2.方法 将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于枸橼酸盐培养基上，35℃培养24～48小时，观察结果。
3.结果 培养基呈深蓝色反应者为阳性，阴性者培养基中无细菌生长，仍为绿色。本试验大肠埃希菌为阴性，产气肠杆菌为阳性。
靛基质（I）、甲基红（M）、VP(V)、枸橼酸盐利用（C）四种试验常同时用于鉴定大肠埃希菌和产气肠杆菌，合称为IMViC试验。

操作可按下表进行生化反应接种