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【微生物检验笔记】第20章 弧菌科及其检验
弧菌科共同特点：氧化酶阳性、具有极端鞭毛、动力阳性、发酵葡萄糖的革兰阴性直或弯的杆菌。
弧菌科（包括四个属）：弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属（此三属均可对人致病）、发光杆菌属（该属对人不致病）。
一、弧菌属（多分布在水中）（分四类—WHO按抗原性、生化、DNA同源性、致病性和耐盐性分）
-1）01群霍乱弧菌
-2）不典型01群霍乱弧菌
-3）非01群霍乱弧菌
-4）其他弧菌（副溶血弧菌）
对人类致病的主要有霍乱弧菌和副溶血弧菌，分别引起霍乱和食物中毒。
（一）霍乱弧菌（霍乱的病原体，是一种烈性肠道传染病，发病急、传染性强、死亡率高）
分类：古典生物型、EI-Tor生物型
1、生物学特性
（1）形态染色：本菌呈弧形或逗点状，无芽孢，有菌毛，有些菌株有荚膜。一端有一根粗而长的鞭毛，运动活跃。取患者米泔水样便作悬滴观察，可见该菌呈穿梭样或流星状运动。液体培养物滴片染色镜检，可见排列如“鱼群状”革兰阴性弧菌。
（2）需氧或兼性厌氧，在普通培养基上生长良好。耐碱不耐酸。可在无盐环境生长。
碱性蛋白胨水中，经35 oC培养6-9h，在液体表面大量繁殖形成菌膜，可达快速增菌的目的。
碱性琼脂平板上，经培养18-24h，形成较大、圆形、扁平、无色透明或半透明似水滴状菌落。
硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）上，形成较大黄色菌落。
在含亚碲酸钾琼脂平板上，因为还原亚碲酸钾形成金属碲，使菌落中心呈灰褐色。
庆大霉素琼脂上形成的菌落中心呈灰褐色。
（3）生化反应：能分解甘露醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、产酸不产气。迟缓发酵，不分解阿拉伯糖。氧化酶、明胶试验和ONPG试验均阳性。能产生靛基质，霍乱红反应（即：亚硝基靛基质试验）阳性。
（4）抗原结构与分型：霍乱弧菌具有耐热的特异性O抗原和不耐热的非特异性H抗原。H抗原为弧菌属共有，特异性低，O抗原特异性高，具有群特异性和型特异性，是分群和分型的基础。
按是否与01群抗血清凝集分：
|—->01群霍乱弧菌
|———>不典型01群霍乱弧菌
|—->非01群霍乱弧菌
|———>O139群霍乱弧菌
（5）变异性：有形态变异、菌落变异、溶血性变异、毒力变异
（6）抵抗力：本属菌对热、干燥、日光、酸、消毒剂很敏感。但耐碱力较强。
******** 01群霍乱弧菌有：古典生物型、EI-Tor生物型
******** 多粘菌素B敏感试验可用于古典生物型和EI-Tor生物型鉴别
2、微生物学检验
（1）标本采集：
标本以粪便为主，尽可能在患者用药之前采取。
可用无菌棉拭子采集病人自然排出的新鲜粪便，也可用直肠拭子直接插入直肠3-5cm处采集。
一般米泔水样便采集1-3ml，成形便采集蚕豆大小
采集的标本要及时接种适宜培养基，不能及时接种的标本要接种于保存或运送培养基内尽快送检。
常用的保存和运送培养基有碱性蛋白胨水、文-腊二氏保存液、卡布运送培养基。
（2）检验方法及鉴定
霍乱弧菌两个生物型的鉴别：
| 性状 | 古典型 | EI-Tor型 |
| 溶血（羊红细胞） | – | D |
| 血凝（鸡红细胞） | – | + |
| VIP试验 | – | + |
| 多粘菌素B敏感试验 | + | – |
| 噬菌体IV组裂解 | + | – |
| 噬菌体V组裂解 | – | + |
3、临床意义：
致病物质：霍乱肠毒素、鞭毛、菌毛。
所致疾病：霍乱（临床表现：剧烈腹痛、呕吐，导致严重脱水、代谢性酸中毒、休克、死亡）。
免疫性：霍乱病后可获得牢固免疫力，再感染者少见，小肠内有sIgA形成。
（二）O139型霍乱弧菌
属非01群霍乱弧菌，可与O139抗血清凝集
治疗原则：输液，纠正电解质紊乱，选用合适的抗菌药
（三）副溶血弧菌—–是一种嗜盐性弧菌。常存在于近海岸海水、海产品及盐浸食品中。是沿海地区最常见的食物中毒病原菌、
1、生物学特性
（1）形态染色：革兰阴性菌，随培养基不同菌体形态差异较大，有卵圆形、棒状、球杆状、梨状、弧形等多种形态。两极浓染。菌体一端有单鞭毛，运动活泼。无芽孢、无鞭毛。
（2）培养特性：需氧，营养要求不高，在普通培养基中加入适量NaCL即能生长，氯化钠最适浓度为3g/L，在无盐培养基中不生长。本菌不耐热，不耐冷，不耐酸，对常用消毒剂抵抗力弱。生长所需pH为7.0-9.5，最适pH为7.7。
在液体培养基中形成菌膜。
在35g/L氯化钠琼脂平板上呈蔓延生长，菌落边缘不整齐，凸起、光滑湿润，不透明；
在副溶血型弧菌专用选择性培养基上形成1-2.5mm，稍隆起、浑浊、无粘性、绿色菌落。
在SS平板上不生长或长出1-2mm扁平无色半透明的菌落，不易挑起，挑起时呈粘液丝状。
在羊血琼脂平板上，形成2-3mm、圆形、隆起、湿润、灰白色菌落，某些菌株可形成β溶血或α溶血。
在TCBS琼脂上不发酵蔗糖，菌落绿色。（与霍乱弧菌想区别—霍乱弧菌是黄色）
（3）生化反应：本菌在30g/L氯化钠和70g/L氯化钠培养基中生长，在无盐或100g/L氯化钠培养基中不生长.,
神奈川试验：是致病菌株能使人或兔红细胞溶血，对马红细胞不溶血的现象。
2、微生物学检验
1）标本采集：主要是患者的粪便、可疑食物、炊事用具的洗涤液等。
2）检验方法及鉴定：
-1）增菌培养：取标本0.5-1ml接种40g/L氯化钠蛋白胨水中，37oC培养，弱有本菌存在，一般数小时即出现明显浑浊，即可分离培养；
-2）分离培养：将标本或增菌培养物接种副溶血弧菌选择培养基35oC培养18-24h观察结果。菌落湿润、浑浊无粘性，呈绿色；
-3）鉴定：根据其形态、染色、多形性、活泼动力等特点，以及在选择培养基上的菌落特征，结核氧化酶试验阳性，在KIA上K/A，硫化氢阴性。在MIU上“++ – ”。以及嗜盐试验和血清学分型可作初步鉴定。
最后鉴定：必要时作进一步生化试验及毒力试验。
3、临床意义：致病因子有粘附因子（主要为菌毛）、毒素（如耐热性溶血素）。
所致疾病为食物中毒及急性胃肠炎，常为被污染的海产品及盐腌制品所致，此君尚可引起浅表创伤感染、败血症等。
4、治疗原则：选用合适的抗生素及其他抗菌药物，严重病例需输液及补充电解质。
二、气单胞菌属与邻单胞菌属
（一）气单胞菌属—广泛分布于自然界，可从水源、土壤以及人大粪便中分离。本属细菌有的可引起人类腹泻。
1、生物学特性
（1）形态染色：革兰阴性短杆菌，大小（1-4）μm*(0.1-1)μm，菌体两端钝圆，单极鞭毛，运动极为活跃（除杀鲑气单胞菌外）。无芽孢，有窄的荚膜。
（2）培养特性：需氧或兼性厌氧。最适生长温度30oC，但在0-40oC皆可生长。营养要求不高，
在普通培养基上35oC经24-48h形成1-3mm大小，微白色半透明的菌落；
在血琼脂上形成灰白、光滑、湿润、凸起直径约2mm的菌落，多数菌株有β溶血环，3-5天后菌落呈暗绿色；
在肠道选择培养基上，大多数菌株形成乳糖不发酵菌落；
在TCBS琼脂上生长不良
液体培养基中呈均匀浑浊。
（3）生化反应：发酵葡萄糖产酸，氧化酶和触酶试验阳性，在65g/L氯化钠中不生长。
2、微生物学检验
（1）标本采集：根据不同疾病采集粪便或肛拭子、血液、浓汁、脑脊液、尿液等标本。
（2）检验方法及鉴定：
1）直接涂片：标本涂片革兰染色镜检，呈革兰阴性短杆菌。悬滴标本观察动力，运动活跃。
2）分离培养：
血液标本经肉浸液或胰话酪蛋白大豆肉汤内增菌后转种血琼脂平板或含氨苄青霉素血平板；
浓汁、分泌物等直接接种血琼脂平板；
粪便标本接种肠道选择性培养基，另一部分标本可接种于PBS，置4oC冷增菌后，与1、3、5、7、17天移种分离平板上。
标本接种后，经37oC培养24-48h，观察菌落。
3）鉴定：
-1）初步鉴定：挑可以菌落接种KIA、MIU作初步生化反应，KIA：K/A、产气+/-、硫化氢阴性，MIU：++ – ；氧化酶阳性；
-2）最后鉴定：氧化酶试验阳性可与肠杆菌科细菌鉴别，发酵葡萄糖可与非发酵菌鉴别。
（二）邻单胞菌属
本属细菌只有一个种即：类志贺邻单胞菌。存在于水、鱼、动物和人类肠道。能引起人类水样腹泻和实物中毒，在机体免疫力降低时，可引起蜂窝织炎、骨髓炎、脑膜炎和败血症。
与志贺菌属的鉴别：氧化酶和动力试验，邻单胞菌均为阳性，志贺菌均为阴性。
（三）临床意义
气单胞菌可引起腹泻，并可引起伤口感染及菌血症，偶尔引起心内膜炎、脑膜炎、肺炎、脊髓炎、腹膜炎、关节炎、血栓性静脉炎和胆囊炎。
邻单胞菌属中类志贺邻单胞菌引起水样腹泻，亦可一起菌血症可伴有脑膜炎。
（四）治疗原则
选用合适的抗菌药物，如严重腹泻（如霍乱样腹泻），应输液及纠正电解质紊乱。
